20161128 行业关注 肺癌NGS&数字PCR产品注册进展

2016-11-28    编辑:诺禾致源

2016年11月25日,第六届中国病理年会在合肥举行,在专题展示会上北京诺禾致源科技股份有限公司(以下简称诺禾致源)以“肺癌NGS&数字PCR产品注册进展”为主题介绍了NGS&数字PCR技术方法在肺癌分子病理,临床诊疗实践中的应用以及肺癌相关基因检测产品的注册进展情况。


周晓军主任


林冬梅主任

会议由南京军区南京总医院病理科主任,南京大学医学院周晓军教授主持并致辞。北京大学肿瘤医院病理科林冬梅主任首先做了题为《新技术在非小细胞肺癌(NSCLC)分子病理中的应用》的讲座。林主任概述了肺癌分子病理检测现状,肺癌患者有赖于可靠的病理检测结果以选择合适的治疗方案。传统的病理学经典检测技术存在人为影响大,检测通量低,无法定量等缺陷和不足。近年来发展迅猛的二代测序(NGS),数字PCR等新技术具有高灵敏度,高通量,可同时检测多个基因的优势,临床应用“红火”,甚至混乱,但迄今为止业界还没有公认的定量评估检测性能的标准和方法,亦无成熟的行业检测规范和CFDA获批检测试剂盒。林主任着重强调了病理质控在NGS检测流程中的重要性。NGS共识推荐肿瘤细胞纯度须高于30%,肿瘤细胞纯度低于一定比率的样本无法准确检出突变。EGFR、ALK、ROS1、RET、KRAS、BRAF、HER2和MET八个基因被NCCN指南列为NSCLC诊断和疗效检测的靶标。基于此,诺禾致源开发了包括EGFR/BRAF/KRAS/PIK3CA/ALK/ROS1的肺癌靶向用药试剂盒及配套软件并申请注册,并预计在2017年取得注册证。林主任也结合与诺禾致源的合作经验和自己的实践经验指出,选择有明确靶向药基因的小panel检测会有更好的应用前景。此外,具备分子生物学实验技术,生物信息学分析,医学遗传学背景等相应资质的工作人员,性能稳定的试剂,持续不断地学习和开展质控也是一个合格的分子病理实验室建设所必须的。

最新版的NCCN非小细胞肺癌临床实践指南将ctDNA作为组织不可取的首选替代样本。ctDNA中基因突变丰度低,多在5%以下,肺癌ctDNA EGFR T790M耐药突变丰度中值在1%左右,故亟需高灵敏度检测技术。林主任比较了NGS,ARMS-PCR和数字PCR在血浆ctDNA检测上的优劣差异,指出数字PCR是基于固相芯片,单次耗材,不易污染,可精确定量核酸拷贝数,灵敏度可达单个核酸分子,稳定检测限低至0.1%,适用于临床意义明确的特定基因特定位点的低频突变检测和监测,如血液中EGFR T790M突变。



杜瀛瀛主任

随后,来自安徽医科大学第一附属医院肿瘤科的杜瀛瀛主任也分享了自己对NGS和数字PCR在NSCLC临床应用尤其是酪氨酸激酶抑制剂(TKI)耐药问题上的看法和认识。目前有将近一半的肺癌治疗药物属于TKI类药物,免疫抑制剂治疗所占比重约为五分之一,其余为传统化疗药物等。现有的一代、二代TKI一线治疗EGFR敏感突变的NSCLC的无进展生存期(PFS)约为9-11个月,之后大部分患者不可避免地产生耐药。在耐药性突变中,EGFR T790M突变约占50%,其余突变基因还包括TP53, PIK3CA等。鉴于耐药患者组织不易获取,血液检测T790M是理想的替代样本,因此利用数字PCR技术对肺癌耐药患者进行初筛以明确是否存在该突变,是一个比较好的选择,这与林主任的观点一致。对于非T790M突变的患者,可基于NGS技术进行多基因检测,明确是否有旁路关键基因激活如PIK3CA,PTEN和BRAF突变,HER2, MAPK1扩增等,或下游信号通路的活化如MET扩增或14外显子跳跃突变,HGF过表达等,从而选择相应的靶向治疗药物。同时,杜博士还提到,突变基因数量多,负荷大的NSCLC患者接受免疫治疗的效果好,意味着NGS或许可用于鉴别哪些病人接受免疫治疗的获益可能性大。


刘冰博士

最后,诺禾致源肿瘤事业部高级医学联络官刘冰博士介绍了基于NGS和数字PCR平台肺癌分子病理诊断试剂的注册进展情况。近十年来,测序技术的飞速发展和测序成本的不断降低在相当程度上推动了TKIs肺癌靶向药物从研发到上市的历程。以奥希替尼(AZD9291)为例,其研发仅历时6年,经过两年多的临床试验后于2015年获批用于治疗EGFR T790M突变或对其它EGFR-TKIs耐药的非小细胞肺癌,较之传统药物研发历时十余年,6-7年临床试验而言,堪称药物神话偶遇技术变革的时代之幸。另一方面,临床上对精准、全面、统一、且费用相对低廉的多基因检测的巨大需求更是推动了高通量技术(NGS)的持续发展。除NGS外,具有诸多优势的液体活检还推动了数字PCR等高灵敏技术的发展。由于血浆ctDNA具有个体差异大,突变频率低,半衰期短的特点,这就对ctDNA检测技术提出了极大的挑战。刘博士介绍了诺禾致源与北京肿瘤医院合作采用数字PCR检测一代EGFR-TKI耐药的肺腺癌患者血浆中T790M突变的情况,数据显示有约三分之一的突变频率≤1%的低频样本会被传统的RT-PCR漏检,但可被数字PCR检出,显示了该技术平台的卓越性能和巨大潜力。刘博士还阐述了NGS和数字PCR产品作为体外诊断试剂注册的必要性,预计诺禾致源数字PCR产品EGFR基因T790M突变试剂盒会在2017年通过体系考核,获得相关资质。

与会专家普遍认为新技术在临床中的应用要结合患者的实际情况进行全程管理:寻求治疗方案的患者推荐NGS平台进行多基因检测,为治疗前用药方案的确立提供参考依据;靶向药物治疗过程中的患者,采用数字PCR技术检测血液样本中临床意义明确的单基因单位点进行动态监测,藉此调整用药方案。NGS和数字PCR技术的结合应用,能为更多肿瘤患者提供更多的帮助。


卫星会会场


现场讨论


转载自【测序中国】