蛋白表达纯化

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结果展示

PCR扩增目的基因

目的基因合成后,采用高保真酶扩增目的基因,目的基因大小为1065 bp, 如图1~10明亮条带。扩增好的目的基因用于构建重组质粒。

重组质粒双酶切鉴定

用特异性切割酶 BamHI 和 XhoI 切割重组质粒,鉴定目的基因是否成功连 接到载体上。酶特异性切割后结果显示目的基因成功连接到载体上。

表达小试鉴定

蛋白表达小试过程利用 SDS-PAGE 和 WB 鉴定目的蛋白是否有表达,结果 显示目的蛋白有特异性表达,且蛋白大小为60 kDa左右。

亲和层析纯化

使用Ni亲和层析法对目的蛋白进行纯化,随着咪唑浓度增加,目的蛋白纯度 越来越高,泳道6的目的蛋白纯度达到90%以上。

凝胶过滤层析纯化

使用凝胶过滤层析法进一步纯化目的蛋白,既可以鉴定目的蛋白的聚集形 式,也可以达到进一步纯化目的蛋白的作用。结果显示目的蛋白以单体形式 存在,且性质均一,蛋白纯度达到95%以上。