血液RNA提取样本制备

2017-03-16    编辑:诺禾致源

血液是由红细胞、白细胞及血小板构成,
哺乳动物成熟的红细胞和血小板是无核的,
所以其RNA主要来自于白细胞,
血液RNA提取样本制备常见的方法有PAXgene RNA tube法和TRIzol法两种。

PAXgene RNA tube法

TRIzol法

备注:

1.若购买商品化采血管,则无需另外加入抗凝剂,直接按比例加入TRIzol即可。
2.由于物种差异,生理状态的不同,取样操作过程等影响也会造成的RNA浓度及降解程度上的轻微差异。
3.因为血液冷冻后,再融解时细胞破裂会释放RNA酶,从而导致RNA被严重降解,提取结果不理想,故不能用直接冻存的血液样本来提RNA。
4.血液DNA样本的制备要求为全血样本,并加入抗凝剂,推荐使用EDTA抗凝的采血管收集样品(由于会影响实验,切勿使用肝素抗凝,无论是DNA还是RNA都不能使用肝素),冷冻后,干冰运输。
5.红细胞裂解液是一种不破坏白细胞又能充分的将红细胞裂解去除(适用于人,大小鼠等哺乳动物新鲜血液),获得血液样品中全部白细胞并充分保证白细胞的生物活性的buffer。简单来说,红细胞裂解液是用来获取哺乳动物血液中得有核细胞的。因此对于有核的禽类红细胞,红细胞裂解液是发挥不了作用的。使用红细胞裂解需要注意:血液与裂解液需充分混合后,离心,获得沉淀,用缓冲液清洗一遍后获得白细胞。